這些你必須了解的ELISA試劑盒測(cè)定技術(shù)的發(fā)展過程

ELISA試劑盒試驗(yàn)是一種敏感性高，特異性強(qiáng)，重復(fù)性好的實(shí)驗(yàn)診斷方法。Elisa試劑盒臨床測(cè)定技術(shù)發(fā)展主要用于方法學(xué)的發(fā)展，而Elisa試劑盒使用方法學(xué)的發(fā)展依托于試劑生產(chǎn)技術(shù)不斷進(jìn)步更新和型標(biāo)記物的應(yīng)用。目前，分子生物學(xué)正在并zui終肯定會(huì)讓我們對(duì)整個(gè)生命科學(xué)有一個(gè)全面而*的認(rèn)識(shí)，其對(duì)免疫測(cè)定技術(shù)發(fā)展的影響也是直接而又有效的，它使我們對(duì)以前一些難以檢測(cè)的生物活性物質(zhì)的測(cè)定變得輕而易舉，并且大大提高了檢測(cè)的靈敏度和特異性，由于其試劑穩(wěn)定、易保存，操作簡(jiǎn)便，結(jié)果判斷較客觀等因素，已廣泛應(yīng)用在免疫學(xué)檢驗(yàn)的各領(lǐng)域中。
1、 基因工程酶及其融合蛋白
除了基因工程抗原、抗體外，與標(biāo)記免疫測(cè)定有關(guān)的另一中重要的基因工程試劑就是酶及其融合蛋白，以重組酶建立免疫測(cè)定方法較為成功的是CEDIATM均相酶免疫試驗(yàn)。
使用基因工程酶技術(shù)生產(chǎn)免疫測(cè)定標(biāo)記酶，是得到符合標(biāo)記要求的高純度酶的一條新途徑，但如以其他蛋白（抗原或抗體）融合的方法，不但避免了繁瑣且低效率的酶與蛋白的化學(xué)交聯(lián)，而且無需得到純化的酶和抗原或抗體。隨著分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展，將有越來越多的酶免疫測(cè)定方法建立在基因工程酶或其融合蛋白的基礎(chǔ)之上。
2、ELISA試劑盒基因工程抗體及其功能試劑
80年代后人們開始使用基因工程技術(shù)制備抗體，并進(jìn)而將抗體分子片斷與其它蛋白（或另一種抗體分子）融合得到多功能試劑，到目前為止，基因工程抗體在免疫測(cè)定上的應(yīng)用尚處于一個(gè)初級(jí)階段。且主要是將抗體與其它蛋白以融合蛋白形式表達(dá)而得到多功能試劑，如澳大利亞學(xué)者應(yīng)用基因工程技術(shù)制備了抗人紅細(xì)胞抗體與HIV-1gpN41的融合蛋白。這種重組蛋白，即基因工程雙功能試劑，在此基礎(chǔ)上，建立了快速，靈敏和特異的自身紅細(xì)胞凝集試驗(yàn)（AGEN）.
3、基因工程
較早用于免疫測(cè)定的基因工程抗原是HBcAg和HBsAg,這兩種基因工程抗原的出現(xiàn)，較好地解決了抗HBc和HBe的測(cè)定問題。因?yàn)橐獜牟《颈旧砣ゴ罅揩@取這兩種純抗原較為困難，并且這一點(diǎn)對(duì)于難培養(yǎng)的病原微生物來說，如HIV、HCV和梅毒螺旋體等都有些共性。
4、基因工程試劑對(duì)免疫測(cè)定技術(shù)發(fā)展的影響
ELISA試劑盒免疫測(cè)定技術(shù)的基礎(chǔ)在于抗原抗體之間的特異結(jié)合反應(yīng)，所以任何的診斷試劑離不開的原料，如抗原抗體，酶等。以前用于免疫測(cè)定的抗原通常為各種純化抗原，而抗體則為純化抗原免疫動(dòng)物后獲得的多克隆抗體和使用雜交瘤技術(shù)得到的單克隆抗體，而抗原或抗體的標(biāo)記物如酶標(biāo)結(jié)合物則通過各總化學(xué)合成方法制備。近年來，隨著分子生物學(xué)的發(fā)展，使用基因工程方法制備各種特殊的抗原或抗體及其酶結(jié)合物等免疫測(cè)定試劑幾成為現(xiàn)實(shí)的新一代試劑，各種新型使用的測(cè)定方法也不斷出現(xiàn)。