冷凍切片原理及其制作方法分析

    冷凍切片是利用物理降溫的方法將新鮮的組織標本冷凍使其產(chǎn)生一定的硬度進行切片的技術(shù)方法。與石蠟切片相比，由于冷凍切片不需脫水包埋因此制片速度 快，是為手術(shù)進行中的臨床醫(yī)師提供病理診斷的良好方法。ELISA試劑盒此外由于冷凍切片的標本是未經(jīng)固定的新鮮組織，因此冷凍切片也是脂肪染色、酶組織化學(xué)染色以及某些 免疫組織化學(xué)染色和原位分子雜交的理想制片方法。冷凍切片的不足是組織細胞的形態(tài)略遜于石蠟切片。

二、冷凍切片的制作方法

利用氯乙烷噴灑、二氧化碳噴射、半導(dǎo)體制冷的方法均可制作普通的冷凍切片，用于術(shù)中的病理診斷。恒冷箱冷凍切片機可以制作適用于各種目地的冷凍切片，是目前zui為常用的理想冷凍切片制片方式。

1.冷凍切片的技術(shù)操作方法

(1)將恒冷箱冷凍切片機的速凍頭和箱內(nèi)溫度調(diào)整到適宜的切溫度，一般情況下為一18～一25℃。
(2)在標本冷凍托上涂布一層冷凍包埋劑一OCT，然后將取材后新鮮標本安放在標本冷凍托上并用OCT覆蓋標本。
(3)標本冷凍完成后將標本托固定在切片機的機頭上，調(diào)整機頭位置使其恰好位于切片刀的后方。
(4)使用粗切削方式進行標本的粗切削至暴露標本的zui大平面，ELISA試劑盒使用自動推進方式連續(xù)切削2～3刀后用毛筆清除機頭、標本托及切片刀上的組織碎屑。
(5)調(diào)整并確認切片的厚度，一般為4～8 um，染脂肪和神經(jīng)組織應(yīng)控制在12~25 um。
(6)放下防卷板使防卷板的位置恰好與切片刀的刀刃*平行并略突出于刀刃。
(7)以自動推進的方式進行切片，良好的切片將在防卷板的下方形成一張完整平整的薄片，如切片略有彎曲可用小毛筆輕輕展平切片。
(8)打開防卷板，用載玻片平穩(wěn)地輕壓切片使其平整地吸附到載玻片上。

三、冷凍切片的染色

切好的冷凍切片立即投入丙酮中進行固定，一般固定1～2 min即可進行染色，用于免疫組化染色的冷凍切片應(yīng)在切片略干時即刻投入冷甲醇中固定10~15 rmin然后進行相應(yīng)的組織化學(xué)染色程序。

1．冷凍切片的HE染色程序。

(1)切片在丙酮中固定1～2 min。
(2)水洗5 s。
(3)使用新鮮的Harris蘇木精染液染細胞核2min。
(4)水洗5 s。
(5)在0.5％的鹽酸乙醇液中分化1～3 s。
(6)水洗5 s。
(7)在0.5％～1％的伊紅染液中染細胞質(zhì)20~30 s。
(8)水洗5 s。
(9)在95％乙醇I、95％乙醇Ⅱ、100％乙醇I、ELISA試劑盒100％乙醇Ⅱ、中逐級脫水各3～5 s。
(10)甲苯I、二甲苯Ⅱ透明各5 s。
(11)干組織周圍的二甲苯，在二甲苯尚未干燥前滴加光學(xué)樹脂膠封片。